為什么外源蛋白誘導表達量特別少？

外源蛋白誘導表達量特別少，求大俠解惑

本人研一，老板讓我做一個蛋白的抗體，首先得將該蛋白外源誘導表達出來
我的目的基因大小是3600，目的蛋白大概130KD
用的載體是HisB，大約4400bp
酶連很順利，開始用的是大腸JM109進行表達，0.5M的IPTG，37度誘導6小時
一跑膠發現有條帶可是特別細，做了幾次誘導效果都不怎么好
不知道到底是什么原因？難道因為外源片段太大了載體承受不了？或者宿主菌不對？誘導的條件需要改進？
求高人指點，不勝感激~~~
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超過100KDa的蛋白不是很好表達，可以試試不同的宿主。

你換Top10做什么啊，這個是克隆宿主，不是表達宿主。。。

對啊，你應該用表達宿主BL21或其他
而且我覺得還要看你用的是什么vector

我們這邊有人就是用TOP10做HISB的表達啊,而且效果很好呢
剛用TOP10取的樣跑了個膠,效果跟JM109差不多,也很細
轉了BL21的剛長上

對啊，你應該用表達宿主BL21或其他
而且我覺得還要看你用的是什么vector

呵呵,BL21轉了幾次了都不長的,今天終于長了,準備試一試
載體是HISB,查了一下可以用JM109和BL21,不過也有很多人用TOP10的

LZ的蛋白可溶性高嗎？如果可溶性低的話純化的兩是很少的~

暈死。怎么能用克隆宿主的哇。。。。
要用表達宿主。

我遇見很多這種同學了。。
一定要配套好表達載體和宿主。。。
額。。樓主好好學習下p ET系列的基本知識。

LZ的蛋白可溶性高嗎？如果可溶性低的話純化的兩是很少的~

我也想了這個問題，所以今天拿沉淀跑了個膠，還不知道結果

誘導溫度是不是太高了啊